开化殪癌细胞更新剂的大鼠长期毒性实验研究

 

天津市医药科学研究所药理一室

在 天化殪癌细胞更新丸(以下简称天化殪)的药效学试验中,0.5-1.0g/Kg剂量对小鼠移植性肿瘤有良好效果,但1g/kg,剂量组的动物有死亡或体重 降低的现象,故以0.7 g/kg作为有效的高剂量对待.在此基础上天化殪的长期毒性实验设立了三个给药剂量组,即0.75、0.5及0.75g/Kg,连续给三个月(12周), 观察药物对大鼠全身及各器官的毒性反应,以对药物的安全性提供依据和做出进一步的评价.
材料与方法:
一.动物:健康Wistar大鼠80只,雌雄各半,体重70-90g,由北京军事医学科学院实验动物中心提供.
二.药物:天化殪为淡黄色汾未,使用时用蒸馏水配成混悬液.
三.试剂:本实验所用血液生化指标试剂盒分别由天津试剂二厂、北京化工厂改床试剂分厂、台湾BGH生物化学公司、保定长城临床试剂公司等提供.
四.具体方法:
1.分组:80只大鼠,雌雄各40只,按体重随机分成四组,每组雌雄各10只,给药的有三组:高剂量组为0.75g/kg、中剂量组为0.5 g/kg、低剂量组为0.75 g/kg,另设一空白对照组.
2.给药:给药途径为灌胃给药(与临床用药口服途径一致).给药组根据大鼠的体重按各剂量组的要求,即0.75 、0.5、0.75g/kg,每日分别灌 胃一次,连续给药三个月(12周),空白对照组每日每鼠灌胃蒸馏水1ML,亦连续给三个月(12周).饲料由天当市卫生局动物中心提供.
3.观察指标:
1)动物的全身状况、行为表现、进食情况(每周测一次进食量)、毛色及外见.
2)体重增长情况:每周各组称体重一次,记录并绘制体重增长曲线.
3)血尿常规及血液生化指标:给药三个月后和组大鼠用眶内取血法采血,进行血规(血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及分类、血小板计数)和凝血时间测定, 血液生化测定指标为:谷丙转氨酶(SGPT)、谷草转氨酶(SGOT) 、碱性磷酸酶(AKP) 、总胆红素(SB) 、总蛋白(TP) 、白蛋白和球蛋 白的比值(A/G) 、尿素氮(BUN) 、肌酐(CR)、总胆固醇(CHOL)、血糖(BLS)等,并取半数动物的尿液做尿常规检查(尿糖、尿蛋白定性 及镜检).
4)病理检查:给药三个月后,各组动物以乙醚麻醉,称重后处死、解剖,用肉眼观察各脏器大体情况与变化,然后取心、肝、肺、脾、肾、脑、胸腺、膀胱、甲状 腺、肾上腺、睾丸、前列腺、卵巢、子宫、胃肠、十二指肠、回肠、结肠等脏器先以扭力天平称重并计算脏器系数,然后以15%中性福尔马林固定,石蜡包埋,切 片,HE染色,镜检.
实验结果:

一.全身情况:整个实验过程中各组大鼠的行为表现,外观、毛色均未见异常,除高剂量组雌性大鼠历操作不慎灌死一只以外,名给药组与对照动物组均无死亡.各 组动物基本上随实验时间的延长,体重逐周递增,但高剂量组动物的体重增长不如对照组,中剂量组的雌性动物体重增长也略低于对照组,而低剂量线动物的体重增 长均高于对照组.其体重增长率及生长曲线分别见表1 、2和图1 、2.

表1.对雄性大鼠体重的影响(X±SD)

组别

实验前

实验后

增长率(%)

对照组

80.4±6.7

374.5±56

365

低剂量组

80.0±8.9

440.0±66

451

中剂量组

80.4±8.4

398.0±39

395

高剂量组

80.0±7.4

352.0±61

340

 

表2.对雌性大鼠体重的影响(X±SD)

组别

实验前

实验后

增长率(%)

对照组

72.1±7.2

278.0±38

286

低剂量组

70.0±7.7

286.5±21

309

中剂量组

70.4±8.4

264.5±22

276

高剂量组

73.0±7.5

2540±25

248

由 表1.2可见,高剂量组的两种性别的动物体重增长率虽不主对照,但经统计学处理,并无显著意义(p>0.05),值得注意的是低剂量组雄性大鼠的体 重增长率却明显高于对照组,增长率分别为451%和365%,且有显著意义(p<0.05)中,是剂量组则基本上与对照组相近.

 

二.血常规:对各组大鼠的血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)、白细胞计数(WBC) 、血小板计数(PLAT) 、白细胞分类(WBC-DC)和凝血时间的测定结果分别见表3-表6.

表3.对大鼠HB和RBC的影响        X±SD   N=10

组别

Hb(g/di)♂♀

RBC(X104/MM3)♂♀

对照组

14.3±0.8  12.7±0.4

713±55  704±54

低剂量组

13.5±0.4  11.7±0.9

733±87  703±35

中剂量组

15.3±1.1  14.6±1.3

747±69  708±49

高剂量组

14.4±1.3  14.3±0.5

699±58  698±64

正常值

12____17

600____900

表4.对大鼠WBC和Plat的影响        X±SD    N=10

组别

WBC(X104/MM3)♂♀

PLAT(X104/MM3)♂♀

对照组

14.2±0.16  1.41±0.17

69.6±12.4  76.6±16.4

低剂量组

1.26±0.21  1.35±0.16

86.8±12.9  83.0±14.2

中剂量组

1.40±0.24  1.17±0.13

72.0±17.4  74.9±12.4

高剂量组

1.27±0.14 1.28±0.21

70.6±9.2  89.5±6.4

正常值

0.5____2.5

40____100

*血小板计数采用卡普鲁因稀释液法

表5.对大鼠WBC-DC的影响         X±SD    N=10

组别

中性(N)♂♀

淋巴(L)♂♀

单核(M)♂♀

对照组

23.0±4.5  23.7±4.6

75.2±4.2  74.9±5.0

1.8±1.3  1.4±1.4

低剂量组

21.9±36  23.0±5.0

75.8±4.1  75.4±5.6

2.3±1.3  1.6±1.6

中剂量组

24.0±7.2  21.0±1.8

73.9±7.8  77.2±2.3

2.1±1.4  1.9±1.1

高剂量组

25.3±4.7  22.0±1.7

72.5±4.7  75.0±4.3

2.4±3.4  2.0±1.6

正常值

20——32

56——78

2——4

表6.对大鼠凝血时间的影响       X±SD   N=10

组别

T(分)

对照组

2.45±0.60     2.35±0.58

低剂量组

2.25±0.42     2.25±0.54

中剂量组

2.15±0.63     2.10±0.65

高剂量组

2.06±0.53     2.00±0.33

凡表3-6可见,各给药组的血红蛋白、红细胞、白细胞及白细胞分类值均在正常值范围内,与对照组无明显差异.用毛细管法进行的大鼠凝血时间测定结果表明各组间亦无明显差异.

 

三、血液生化指标:各项血液生化指标的测定结果见表7-表11.

表7.对大鼠血汪谷丙转氨酶和谷草转氨酶的影响.   X±SD   N=10

组别

SGPT(u/dl)♂       ♀

SB(u/dl)♂           ♀

对照组

25.8±9.5    25.6±9.7

244±20   267±43

低剂量组

25.6±12.0   25.5±7.8

248±23   253±37

中剂量组

28.7±5.9    24.5±4.9

267±46   262±54

高剂量组

25.7±5.4    20.4±5.3

237±30   219±25

正常值

<45

表8 . 对大鼠血清碱性磷酸酶和照红素的影响   X±SD  N=10

组别

AUP(u/dl)♂           ♀

SB(u/dl)♂          ♀

对照组

10.5±4.5   13.1±5.3

0.14±0.06  0.17±0.07

低剂量组

18.3±5.5   12.9±7.4

0.18±0.09  0.13±0.06

中剂量组

13.2±3.8   10.3±5.7

0.13±0.07  0.12±0.04

高剂量组

12.2±5.2   12.0±8.1

0.12±0.06  0.13±0.05

正常值

<30

0.1—1.0

表9、对大鼠血浆总蛋白和白蛋白球蛋白比例的影响  X±SD  N=10

组别

TP(g/l)
♂           ♀

A/G
♂           ♀

对照组

66.2±3.1   67.2±4.1

1.35±0.21  1.28±0.26

低剂量组

74.9±4.8   75.4±3.1

1.00±0.11  1.05±0.14

中剂量组

70.1±5.9   77.7±4.8

1.36±0.28  1.28±0.26

高剂量组

74.2±5.0   77.4±3.6

1.18±0.20  1.25±0.11

正常值

60——80

表10、对大鼠尿素氨和肌酐的影响  X±SD  N=10

组别

BLS(mg/dl)
♂           ♀

Chol(mg/dl)
♂           ♀

对照组

106.1±9.2   99.1±12.6

96.5±14.1   94.5±15.7

低剂量组

94.3±10.3   98.0±9.4

98.0±18.1   102.5±14.4

中剂量组

100.3±8.7   101.6±13.2

96.9±37.4   89.2±9.3

高剂量组

108.9±9.6   109.4±9.7

91.2±12.0   95.0±16.5

正常值

80——120

80——220

表10、对大鼠尿素氨和肌酐的影响  X±SD  N=10

组别

BLS(mg/dl)
♂           ♀

Chol(mg/dl)
♂           ♀

对照组

106.1±9.2   99.1±12.6

96.5±14.1   94.5±15.7

低剂量组

94.3±10.3   98.0±9.4

98.0±18.1   102.5±14.4

中剂量组

100.3±8.7   101.6±13.2

96.9±37.4   89.2±9.3

高剂量组

108.9±9.6   109.4±9.7

91.2±12.0   95.0±16.5

正常值

80——120

80——220

凡表7—11可见天化殪对大鼠的10项生化指标测定结果,各组数值均在正常范围之内,与对照组比较亦无显著差异.

四、尿液检查:结果见表12
表12、天化殪对大鼠尿液影响的检查结果

组别

尿糖♂        ♀

尿蛋白♂      ♀

镜检♂         ♀

对照组

——

——

——

低剂量组

——

——

1只有少量磷酸盐结晶

中剂量组

——

——

——

高剂量组

——

1只±—

1只有少量磷酸盐结晶

由表12可见各组大鼠除个别鼠镜检见少量磷酸盐结晶外,未发现糖尿、蛋白质及红白细胞、管型等,而微量的蛋白和少量磷酸结晶亦认为是属于正常范围之内。

1、大体解剖观察:对照组及各药组大体解剖所见皮肤正常,肛周围无分泌物,胸及腹腔浆膜光滑,无积液,各脏器位置正常,表面形态,大小及颜色均属正常。

2、脏器系数,见表13、14

表13、各组雄性大鼠的脏器系数(g/100g体重)X±SD  N=10

器官

对照组

低剂组

中剂量组

高剂量组

0.39±0.05

0.32±0.09

0.36±0.06

0.39±0.06

4.54±0.07

4.13±0.79

4.03±0.27

4.4. ±0.99

0.22±0.03

0.19±0.05

0.25±0.15

0.27±0.01

0.83±0.07

0.76±0.12

0.74±0.45

0.83±0.33

0.78±0.08

0.73±0.15

0.74±0.05

0.83±0.09

肾上腺

0.013±0.004

0.009±0.003

0.013±0.003

0.020±0.005

甲状腺

0.007±0.002

0.007±0.002

0.006±0.002

0.008±0.002

0.53±0.06

0.46±0.07

0.46±0.10

0.57±0.08

前列腺

0.09±0.02

0.11±0.04

0.18±0.04

0.23±0.07

0.84±0.19

0.73±0.29

0.85±0.19

1.04±0.15

表14、各组雌性大鼠的脏器系数数(g/100g体重)X±SD  N=10

器官

对照组

低剂组

中剂量组

高剂量组

0.46±0.06

0.36±0.06

0.41±0.06

0.45±0.06

4.69±0.76

4.15±0.42

4.03±0.35

4.49±0.40

0.31±0.06

0.27±0.04

0.27±0.06

0.29±0.06

1.02±0.10

0.94±0.17

0.76±0.09

0.91±0.11

0.87±0.09

0.73±0.09

0.81±0.09

0.92±0.07

肾上腺

0.026±0.007

0.025±0.003

0.030±0.007

0.030±0.006

甲状腺

0.014±0.002

0.010±0.001

0.011±0.002

0.012±0.002

0.71±0.09

0.67±0.25

0.69±0.05

0.81±0.07

子宫

0.21±0.05

0.15±0.04

0.19±0.05

0.23±0.06

由表13—16可见,各给药组的大鼠脏器系数与对照组经较,无显著差异。有低剂量组,某些脏器系数如:肝、肺、肾均稍低于对照组,这可能与低剂量组体重较大有关。但有一点值得注意,即中剂量组和高剂量组雄性大鼠的前列腺脏器系数明显高于对照组且与剂量有关。

1、 组织学检查:对照组及低、中、高三个剂量给药组大鼠受检脏器为:心、脾、肾上腺、甲状腺、脑、垂体、胸腺、胃、十二指肠、回肠、结肠、胸骨(骨及骨 髓)、淋巴结(颈部)、膀胱、子宫、卵巢、副睾等,均未见显著变化,肺、肝、肾的变化见表15。

表15、各组大鼠脏器变化情况

器官

病变

♀/♂

对照组
10/10

高剂量组
9/10

中剂量组
10/10

低剂量组
10/10

轻度间质性炎局灶性炎小肉芽肿

0/2

0/1
1/0
0/1

1/0

轻度脂肪变性

1/1

1/0

1/0

间质炎细胞轻度浸润

1/0

1/0

由 表15可见,有的动物肺、肝、肾有轻度炎症病病变,考虑为饲养及给药操作等因素所致。高剂量组所见肺的肉芽肿可能为灌胃时因剂量大,误入肺内所形成,肝脏 个别动物轻度变性。可能与动物处死不当有关。总的来说,天化殪在此三个剂量下口服三个月对大鼠主要脏器未见引起毒副作用。

小结

  1. 1、 天化殪对大鼠的长期毒性试验结果表明在剂量为0.75、0.50及0.75g/Kg连续给药三个月,除0.75g/Kg组动物生长稍受影响外其它组与对照组相仿。生化测定指标、血象、肝、肾功能等均无异常可见
  2. 2、 实验病理学观察青蛙,天化殪对心、肝、肾等主要脏器无毒性作用。虽然脏器系数测定时发现给药组前列腺组织器官系数高于对照组,但病理学检查时这种差异不甚明显,尽管如此,在临床上仍应注意观察对老年男性患者前列腺的影响。

天津市医药科学研究所药理一室
实验者:王士贤    匡 朴   韩行湛   胡大杰   李宝媛   姜 卉   于苏萍   刘美芳   郝晓阁   冯文茹等
负责人:王士贤副研究员
表1、天化殪对S180的作用
表2、天化殪对U14的作用
表3、天化殪对LEWIS肺癌的作用
注第2批实验均用雄性小鼠
表4、天化殪对LIPES的作用
表5、天化殪对L79肺腺癌的作用
表6、天化殪对L615白血病的作用
在作对EAC的实验中,对照组平均生存天数为14.1±2.1天,而天化殪1g/Kg(灌胃7天)组平均生存天数为13.9±0.3天,显示对EAC无抗癌活性。

实验小结:通过天化殪癌细胞更新丸对5种小鼠移植性实体瘤的实验表明,天化殪对U14、IIPES、S180、LEWIS肺癌和L795肺腺癌均有良好的 抑瘤作用。在剂量0.5—1.0g/Kg之间基疗效与剂量呈依赖关系,剂量超过2g/Kg则会引起动物死亡数超过20%,剂量低于0.5g/Kg则抑瘤作 用不明显。整个实验均重复3次,结果显示有良好的重现性,说明药效稳定可靠。对L615白血病亦有良好的延长动物生命的作用,同样有良好的重复性。但天化 殪对腹水型肿瘤无效。故提示天化殪在临床上可用于各种实体瘤,也可试用于白血病。