天化殪癌细胞更新基质中蛋白质

 

实验者:王士贤
蛋白质的测定
以定氨法测定样品中的蛋白质。
1、方法
取样约70MG,精密称定,置干燥的300-50ML凯氏烧瓶中,加硫酸钾0.3g—5g,30%硫酸酮溶液5滴,再沿壁加硫酸2ML,在凯氏烧瓶口放一 小漏斗,并使烧瓶成45度斜置,用小火缓缓加热使溶液保持在沸点以下,等泡沸停止,逐步加大火力,沸腾至溶液成澄明的绿色后继续加热10分钟,放冷加水 2ML。
取2%硼酸溶液10ML。置100ML锥形瓶中,加甲基红———澳甲酚绿混合指示液5滴,将冷凝管尖端浸入液面下,然后将凯氏烧瓶中内溶物转入蒸馏瓶中, 再加入40%氢氧化纳溶液10ML,加热蒸馏10分钟,溜出液用硫酸液(0.005mol/l)滴定至溶液由蓝绿色烃为灰紫色,每1ML的硫酸液 (0.005mol/l)相当于0140lMg的N。

2、测定结果

本样品中含蛋白质量见下表:

实验序号

结果(G%)

平均值

1

1.69

2

1.69

1.71

32

1.76

二、氨基酸的测定
以柱后茚二酮衍生法的自动氨基酸分析仪测定。
1、样品预处理方法:取样约60Mg,精密称定,置硬质玻璃安瓶中,加6mol/l盐酸5ML,充氮气赶尽空气后,密封,于110摄氏度水解24小时,将 上述水解液赶尽盐酸后,用0.02mol/l盐酸稀释至10ML,精密量取2ML,再稀释至25ML,选样10μL。

2、结果:根据分仪打印出的各氨基酸峰面积以外算法计算含量,结果见下表:

名称

含量(Mg/g)

名称

含量(Mg/g)

L—天门冬氨酸

13.95

L—异亮氨酸

5.5

L—苏氨酸

5.79

L—亮氨酸

10.18

L—丝氨酸

7.72

L—酪氨酸

1.86

L—谷氨酸

26.68

L—苯丙氨酸

6.10

甘氨酸

5.64

L—赖氨酸

6.82

L—丙氨酸

6.05

L—组氨酸

3.96

L—缬氨酸

6.14

L—精氨酸

9.34

L—蛋氨酸

2.12

L—脯氨酸

6.74

氨基酸的分析图谱见附图。
样品中氨基酸分离图谱
三、微量元素的测定结果(Zn、Se、Mn、Mo)
1、方法
取样0.5%精密称定后置高型硬质烧杯(50ML)中,加HNO3  15ML,盖表面皿放置过夜。次日将烧杯置电热板上加热至微沸,待样品溶液近干时,加高氯酸1ML继续加热至白烟基本冒尽,样品溶液的颜色转白并近干,取 下待稍冷后,以热的1%HNO3溶解残留物,并转移定容于25ML,容量瓶中。
2、测定条件

日立Z——8000原子吸收分光光度计

无素

测定条件

Zn

原子吸收法  空气——乙炔火焰法

So

原子萤光法

Mn

原子吸收法  石墨炉

Mo

原子吸收法  火焰法

3、测定结果(微克/克)

无素

Zn

Mn

Mo

Se

含量(UG/G)

0.125

0.0015

0.002

<2.5×10-6